Come parte del progetto, si prevede di sviluppare e sviluppare un candidato innovativo per un farmaco che induce la degradazione della proteina MCL-1 sulla via proteasoma. La proteina anti-apoptotica MCL-1 è un membro della famiglia delle proteine Bcl-2, che è sovraespressa in molti tipi di cancro. La sovrapproduzione di MCL-1 interrompe l'equilibrio delle proteine anti- e pro-apoptotiche, tra le altre cose, ed è un importante fattore di sopravvivenza per il cancro. Inoltre, le linee cellulari tumorali sono soggette a selezione clonale per le cellule con livelli elevati di MCL-1, con conseguente resistenza alle terapie chemioterapiche e mirate. L'abbassamento dei livelli di MCL-1 da parte di terapie antisenso o siRNA conferma il ruolo oncogeno di questa proteina e apre nuove opportunità per terapie antitumorali mirate. Il farmaco candidato, sviluppato come parte di questo progetto, indurrà l'ubiquitinazione MCL-1 e quindi la sua degradazione proteasoma, che porterà ad un effetto terapeutico. L'innovazione della degradazione proteica mirata consente di rimuovere tutte le funzioni che determinano lo sviluppo della malattia, che nel caso della degradazione proteica MCL-1 è l'esatto opposto della farmacologia degli inibitori di questo bersaglio molecolare. L'inibizione di MCL-1, oltre a bloccare solo il ruolo antiapoptotico, porta anche al suo forte accumulo nelle cellule, ostacolando così il dosaggio del farmaco e portando alla formazione di gravi effetti collaterali. Nella prima fase del progetto, è stata sviluppata una nuova classe di degradanti MCL-1 a piccola molecola.I composti sintetizzati sono stati caratterizzati su base continuativa da test biofisici, tra cui FP, SPR, HTRF e utilizzati in cristallografia. L'attività dei degradanti nei sistemi cellulari è stata valutata utilizzando, tra gli altri, il test di vitalità, il test di misurazione dell'attività della caspasi su piastra, i test di valutazione della permeabilizzazione NanoBRET e il test di degradazione Western Blotting. Il potenziale di composti selezionati è stato valutato nelle cellule primarie animali e umane, cioè nei leucociti isolati dal sangue. Sono stati condotti anche studi di ADME e farmacocinetica, che hanno permesso di determinare i parametri chiave dei composti nei sistemi in vivo ed ex vivo. La sicurezza dei composti selezionati è stata pre-valutata utilizzando test di genotossicità, la capacità di inibire l'attività degli enzimi della famiglia delle proteine CYP, gli effetti sui più probabili off-target e l'identificazione dei metaboliti. Una valutazione preliminare della cardiotossicità è stata effettuata anche in vitro e in vivo durante gli studi tossicologici che hanno comportato la determinazione della dose massima tollerabile (MTD) nei ratti e nelle scimmie. L'effetto farmacodinamico e l'efficacia di composti selezionati sono stati determinati in modelli in vivo - in topi con cellule tumorali umane impiantate. La seconda fase del progetto consisterà in: integrazione dei dati farmacologici e tossicologici di sicurezza per il candidato BPL. Verranno effettuati test in vitro: hERG e 3T3 NRU, nonché studi in vivo di 28 giorni nello standard GLP - sia su specie di roditori che su specie superiori, con valutazione di: mortalità, sintomi clinici, variazioni di peso corporeo, consumo di cibo, patologia clinica, organi macroscopici, istopatologia completa, nonché valutazione della potenziale cardiotossicità (nel caso di animali di specie superiori). b) sintesi del farmaco candidato su scala chilogrammo nello standard GMP, insieme alla specifica del prodotto finale inclusa nel certificato di analisi realizzato per esso. Il composto attivo prodotto su una scala di chilogrammi nello standard GMP, nella fase II del progetto, sarà purificato utilizzando un metodo di cristallizzazione precedentemente sviluppato. Sarà inoltre confermata la forma polimorfica per la forma cristallina risultante del lotto finale del composto attivo, insieme alla misurazione della decomposizione delle particelle del prodotto finale, e saranno effettuati studi di stabilità. c) preparazione della documentazione del nuovo composto candidato necessaria per l'avvio di studi clinici di fase I. d) attuazione di studi clinici di fase 1a.
